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皮质醇ELISA试剂盒定性定量方法
发布时间2017-06-22 浏览次数：1004
皮质醇ELISA试剂盒具有复杂结构的多表位蛋白抗原，其双抗体夹心法中的一个抗体必须用单抗，否则背景很高。当然如果两个都是单抗(这两个单抗针对不同表位)，那么测定的线性范围就较宽，试剂盒性能就较好；一个用单抗，一个用多抗，测定的灵敏度会较高。
某些简单的化合物用皮质醇ELISA试剂盒测定时，因为没有两个或以上的表位，一般只能作为半抗原，只能用竞争法测定。如果你发现有测定简单化合物(如雌激素、NO、地高辛等)用双抗体夹心法作测定原理时，这个试剂盒你就要怀疑了。另外还要说明一步双抗体夹心法与两步双抗体夹心法的区别。
一步双抗体夹心法的吸光度-剂量曲线呈钟形，随着待则标本中抗原浓度的增加而升高至一定程度后，测定吸光度即随抗原浓度的增加而开始下降直至不显色，即所谓的“钩状效应”(hookeHect)，也就是我们在免疫沉淀试验中所称的“带现象”(zonephenomenon)。所以当使用一步双抗体夹心法时，样品浓度太高，有时会出现测不出来的现象，此时要作适当的稀释才能准确测定。
试剂盒的组成：用双抗体夹心法作为测定的方法时，试剂盒的组成一般包括：已包被单抗的酶标板：一块，有96孔的，也有48孔的，可拆缷，外面有铝箔袋密封，打开后有干燥剂，实验时暂未使用的酶标条要连带干燥剂密封好，放在4℃冰箱中妥善保存。
皮质醇ELISA试剂盒的保质期一般都是在一年，如果保存得当的话，不会出现问题的。但不要反复冻融。当然如果是正常的DAS-ELISA检测试剂盒等，应该放在4℃左右冰箱保存。建议elisa试剂盒解冻后一次用完。已开封或者使用后，剩余试剂仍需按照试剂瓶标签所示的温度保存，ELISA检测试剂盒开封后的酶标板要加干燥剂后密封保存于-20℃，避免潮湿。
但要注意的是，如果将elisa试剂盒刚从冰箱里面拿出来就立即使用的话，可能会影响，其直接的后果是对一些弱阳性标本的检测出现假阴性。
建议：先从冰箱中拿出来，在室温下放置20分钟以上后，再进行测定，以使试剂盒在ELISA检测试剂盒使用前与室温平衡。这样做的目的，主要是为了在后面的温育反应步骤中，能使反应微孔内的温度能较快地达到所要求的高度，以满足测定要求。
那么皮质醇ELISA试剂盒的板子什么情况下会失效？
1．通常商品化的酶标板要求密闭4℃保存，长时间暴露或未密闭保存，要么失效，要么结果为非可靠数据；如果是自己包的板，可能效期更短，保存条件要求更高，至于显色剂，正常条件下一天内不会失效的。
2．第三板是否完全按照前两板加所有试剂，如果缺失其中某一步骤，结果也会无色。