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基质皮质醇ELISA试剂盒显色淡的原因
发布时间2017-08-07 浏览次数：1204
基质皮质醇ELISA试剂盒显色淡的主要原因有哪些：
1.原因：试剂盒在运输途中时间太长，温度太高。
解决方案：尽量缩短运输时间，夏季应放冰块降温。
2.原因：试剂盒未充分平衡。
解决方案：试剂盒从2～8℃冰箱取出后打开盒盖，于室温平衡至少20分钟，确保所有试剂已平衡至室温(约25℃)。
3.原因：培养箱温度不足37℃。
解决方案：注意培养箱温度，放入反应板后尽量减少开启次数以免影响温度恒定，非隔水式培养箱尤其应注意。
4.原因：保温时间不足。
解决方案：校正定时钟准确定时。
5.原因：洗涤时冲击力太大、浸泡时间过长、洗涤次数增加。
解决方案：按说明书要求保留洗涤时间，准确记住洗涤次数。
6.原因：移液器吸液量不足，吸嘴内壁挂水太多或内壁不清洁。
解决方案：校正移液器，吸嘴要配套，装吸嘴时要紧密，吸嘴内壁要清洁，一次性使用。
7.原因：蒸馏水水质有问题。
解决方案：使用新鲜合格的蒸馏。
8.原因：底物作用时间不足。
解决方案：准确定时。
注意：显色一定要控制时间，根据试剂盒说明操作即可。一般来说，显色时间过短，结果偏低；显色时间过长，空白增高或者非特异性显色增加。
基质皮质醇ELISA试剂盒参考标准
、标准曲线
1.定量方法：标准曲线至少由5个浓度组成，测定次数不少于5次，以确定工作浓度范围和IC50范围。
2.定性方法：工作浓度范围通过阴性、临界值浓度和阳性的样品测定来确定，每个浓度重复不少于5次，浓度与响应值之间应有一定的关系。
第二、检测限和定量限
1.检测限：20份空白样品测定均值加3倍标准差。
2.定量限：应大于标准曲线中低浓度点。对于定量方法，应对该浓度样品至少测定6次进行验证，而不能通过外延法推断。
第三、临界值（cut-off值）的确定
对于有高残留限量的药物，检测方法的临界值为20份添加MRL浓度的样品重复3次测定的均值减去1.64倍标准差，即95%置信限处。
对于禁用药物，检测方法的临界值为定量限，该值应达到公认的指标。
第四、度和准确度
对于有高残留限量的药物，添加浓度为MRL及MRL上下各一个浓度；对于禁用药物，添加浓度为定量限和2倍定量限，每个添加浓度至少测定5个平行样，并至少进行3批实验（不同检测日期，不同标准曲线，不同批次试剂盒）。
1.准确度：回收率范围大于40%或符合相应检测标准的要求。
2.度：以变异系数表示。
批内变异系数：每批平行样之间的变异系数小于或等于25%，对于禁用药物小于或等于30%.
批间变异系数：所有样品之间的变异系数值小于或等于30%，对于禁用药物小于或等于40%.
定性方法：阴性和阳性样品各测定不少于50份，确定假阳性率和假阴性率。
第五、交叉反应
试剂盒与待检药物类似物、代谢物或共同存在的药物测定交叉反应率。
第六、保存期
保存期通过保存条件的稳定性试验结果确定。
第七、复核试验
1.定量方法：检测限、IC50以及至少两个添加浓度的准确度和度，并与理化方法（或与具代表性进口试剂盒）比较。
2.定性方法：检测限、假阳性率和假阴性率。