发布时间2019-08-19 浏览次数:507
免疫荧光技术有两种检测方法:用荧光标记抗体示踪或检测相应抗原的方法称荧光抗体法;用已知的荧光标记抗原示踪或检测相应抗体的方法称荧光抗原法。其中以荧光抗体方法较常用。
A:1.根据抗原选择合适的抗体:确认抗原可以识别哪一种异构体以及抗原表位的位置。2. 确认您的目的蛋白在该样本中是否表达(这里需要用到阳性对照)。3. 根据您所要研究的目标蛋白来确定合适的样本类型(石蜡切片、冰冻切片还是细胞制备物等)。4.选择抗体时需要考虑该抗体的物种交叉反应;5. 关于蛋白,您需要考虑它的组织定位和细胞定位,以及染色时是否应该有信号。6.选择合适的固定方法及抗原修复方法。7.抗体的工作浓度或稀释比例,以及抗体的物种来源也是需要考虑的重要因素。
对于某些特殊试验样品,比如脑,我们需要确保细胞的渗透性,让化合物能真正进入细胞或血脑屏障。另外需要确保所使用的化学品能够溶于合适的溶剂。还有确定*适合的给药途径(注射或口服)。完成上述所有步骤之后,您就可以获取组织或细胞样品了。
A:对于细胞制备物,它们常见的形式是涂片或培养的细胞系。对于组织样本,*常用的是石蜡包埋的组织切片,福尔马林固定。原因是它们能够保持组织形态与蛋白抗原性之间的*佳平衡。石蜡包埋的组织切片很稳定,并且易于使用。但它的不足之处是很耗时(需要对切片进行脱蜡处理和抗原修复)。一般来说,石蜡切片适用于 4 微米厚的切片。如果切片厚度大于4微米,抗体可能会被困住,导致假阳性染色,这是我们需要避免的。