BCA蛋白浓度测定方法和操作注意事项

BCA 蛋白定量法是一种快速灵敏、稳定可靠的蛋白定量测定方法，其测定范围是10－2000ug/ml，是比Lowry 法更优越的专用于检测总蛋白质含量的产品。

 BCA 蛋白定量测定方法：（96孔板）

1、配制BCA 工作液: 根据标准品和样品数量，按50 体积试剂A，1 体积试剂B 配制适量BCA 工作液，充分混匀。

2、将蛋白标准品按0, 1, 2, 4, 6，8, 10 微升加到96 孔板的蛋白标准品孔中，加灭菌双蒸水补足到10 微升；取10 微升待测样品加入96 孔板。每个测定要做2-3 个平行。

3、向带测样品孔和蛋白标准品孔中加入200 微升BCA工作液（即样品与工作液的体积比为1：20）混匀。

4、37℃温浴30min。冷取至室温。

5、酶标仪562nm 波长下测定吸光度。

6、制作标准曲线，从标准曲线中求出样品浓度。

 BCA 蛋白定量测定操作注意事项：

1、反应颜色的深浅除了与样品的蛋白质浓度相关外，还与反应的温度有关。如果样品的浓度较高（>50μg/ml），反应温度一般采用37 度。如果样品蛋白质的浓度较低（<50μg），反应的温度为60℃，该温度下，色氨酸、酪氨酸和肽键得到充分氧化，大大提高检测灵敏度。

2、该方法检测的蛋白质浓度范围20μg-500μg/ml；当蛋白浓度＜20ug/ml 时，推荐60℃温浴，并将蛋白液：工作液的比例调至1：8 进行测定（增强法）可以检测到5ug/ml。

试剂A 和B 在室温的稳定期至少1 年以上。标准蛋白液保存在－20℃,短期则4℃保存.