各种抗体稀释液的配置方法和配方！

发布时间2022-01-04        浏览次数：745

抗体作为免疫基础实验中常用的试剂，WB、IHC、IF、FC实验应用中都会用到抗体，如何正确使用抗体，其中稀释液的选择非常重要，不同的生产厂家对抗体稀释液的要求都不一样，一般常见的稀释液是自己配置5%脱脂奶粉或者5%BSA溶液。

各种抗体稀释液的配置方法和配方！

辣根过氧化物酶标记抗体稀释液的配制：
1%牛血清白蛋白（稳定剂）；
0.1%冷鱼皮明胶（堵）；
0.05%硫柳汞（防腐剂）；
0.01MPBSpH7.2；

注：
1）抗体稀释使用该缓冲区可以存储在4oC 6个月未还原的结合活性。
2）不要用BSA或其他含血清试剂稀释二抗因为他们可能与牛血清白蛋白或血清抗体的亲和性降低。
3）用TBS稀释二抗常常产生较弱的染色。所以用TBS只有抗体高背景染色和碱性磷酸酶标记抗体由于磷酸盐抑制碱性磷酸酶的活性。

辣根过氧化物酶标记的链霉亲和素稀释液：
0.01MPBS，pH7.2；
0.05%硫柳汞（防腐剂）；

注：
抗体稀释使用这个缓冲区可以存储在4oC6个月未还原的结合活性。
AP链霉亲和素稀释液：
0.05TBS，pH值7.60.05%硫柳汞（防腐剂）；

注：
1）抗体稀释使用该缓冲区可以存储在4oC6个月未还原的结合活性。
2）PBS不能因为磷酸盐抑制碱性磷酸酶的活性稀释剂-美联社。荧光染料（AvidinFITC标记的抗生物素蛋白生物素，德克萨斯红，AMCA）

稀释缓冲液：
0.01MPBS，pH7.20.05%硫柳汞（防腐剂）。

原抗体稀释缓冲液：
1%牛血清白蛋白（稳定剂和阻塞）；
0.1%冷鱼皮明胶；0.05%叠dan化钠；
0.01MPBSpH7.2（pH7.6的TBS用于初级抗体稀释液产生弱染色）；

注：
1）抗体稀释使用该缓冲区可以存储在4oC6个月未还原的结合活性。
2）这个缓冲区不能用于稀释辣根过氧化物酶标记抗体的叠dan化钠酶抑制剂。

使用时按照抗体效价（或个人优化条件），将适量抗体加入抗体稀释液即可。例如，效价为1：100时，可将10ul抗体加入到1ml抗体稀释液中，充分混匀后即可使用。抗体现用现稀释，稀释后的抗体2-8℃可以短期保存，但抗体的效价会随时间而降低