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古朵简述:荧光抗体染色三大方法

发布时间2022-08-26        浏览次数:270

  标签:荧光抗体 古朵生物 染色液


  古朵简述:荧光抗体染色三大方法


  荧光定量PCR 因操作方便、运行速度快、实验结果准-确,受到越来越多的分子生物学研究者青睐。在实验技术成熟的今-天,也许对你来说,难得不是实验技术上的问题——而是选择哪一种荧光定量PCR仪——你要征询实验室成员的意见、分析实验室目前乃至将来的需求、平衡实验室的预算,要详细研究各种极富you惑力的宣传资料。面对各种不同性能的产品,您又该如何选择呢?

  古朵带您认识荧光定量PCR的两个误区:

  误区一:仪器通道越多越好

  随着PCR技术的成熟运用,多重扩增越来越热闹,荧光定量PCR仪也不能幸免。从蕞初ABI公司推出的单通道荧光定量PCR仪发展到如今各个厂家都推出4通道、5通道甚至6通道荧光定量PCR仪,眼花缭乱的选择让人无所适从,就有人一不小心走进了“通道越多越好”的误区。

  考虑多重荧光定量PCR的通道数的时候也应该从实验室实际情况出发,多重PCR并非人人适用、人人可用,因为它使实验复杂化了。

  误区二:PCR仪无需梯度功能

  对于使用染料法的定量PCR反应,虽然有各种各样的PCR引物设计软件或者经验公式计算熔解温度(Tm值),但运用的公式不同、引物序列不同,Tm值的差异会很大。引物的熔解温度决定了退火温度。而且模版中碱基的组合千变万化,对于特殊片断,经验公式得到的数据不一定能得出准-确的结果,退火温度细微的差异对结果都可能产生决定性的影响,因而“摸条件”一度是让人很头疼的问题。梯度PCR的出现部分解决了一些问题——在反应过程中每个孔的温度控制条件可以在zhi定范围内按照梯度变化,根据结果,一步就可以摸索出z适合的反应条件。

  不单退火温度,连变性温度和延伸温度都可以优化——对于多种聚合酶混合酶扩增如Invitrogen、Clontech、Promega的多数高保真Taq酶来说这个非常重要,因为Taq和校正酶的蕞佳反应温度可能有显着差异,优化延伸温度就显得很重要。

  当我们走出误区,想要选择一款z适合自己需求的荧光定量PCR仪时我们又该关注些什么呢?

  1、 仪器的检测通量

  在购买定量PCR仪的时候要根据实验实的需要来选择不同通量的仪器。目前市面上的荧光定量PCR的检测通量小到16个多到384个。如果进行一般的基因表达研究或病原体检测,实在不必购买昂贵的仪器,96孔的通量足够用;需要寻找要新药靶点和疾病标记的实验室可以考虑购买384孔板的仪器。假如经费有限无法购买384孔板仪器的实验室,可以考虑购买运行速度快(带有FAST模块)的96孔板荧光定量PCR仪。有了高通量的仪器,你会发现样品的制备和小体系、多样本的PCR体系构建成为限制实验速度和结果的颈瓶。

  2、 硬件设计特点

  荧光定量PCR仪主要有传统的96孔板式、创新的离心式等,每种设计都有它的独到之处但也都有无法避免的缺憾。

  传统的96孔板的荧光定量PCR可以容纳的样本量大,而且无需特殊的耗材。有些传统的96孔板的仪器采用卤钨灯激发、CCD检测,这些光学结构在96孔板的顶部,每个样品孔距光源和检测器的光程各不相同——边缘效应,对结果产生影响。为了保-证精-确、准-确的实验结果,这类仪器在实验过程中通常会使用ROX(一种荧光染料)或专用的Reference dye作为参照校正实验结果。

  3、 运行速度

  在荧光定量PCR仪的众多技术参数中,升降温速度也是厂家喜欢大力宣传的指标。快的升降温,可以缩短反应进行的时间,而且缩短了可能的非特异性结合、反应的时间,提高PCR的特异性。

  4、 灵活性

  大规模繁忙的实验室设备固然让人羡慕,但是常规实验室同样可以有精彩的选择。现在的仪器供应商拥有众多技术专家,有的还能提供整个分子生物学的基础研究平台,不但了解、满足您现在的需求,而且还考虑到了你可能变化的需求——升级和换模块。

  古朵简述:荧光抗体染色三大方法 上海古朵生物科技有限公司成立于上海浦东新区。是一家专门从事生物技术相关产品,励志研发和销售的综合性生物公司,产品远销多个国家和地区,我们将一如既往地秉承“一切为了满足客户的需求”的经营宗旨;牢固树立“以客户需求为准则、以市场需求为导向,不断开发高质量的新产品,提供客户满意的综合服务质量”的方针。