操作elisa检测试剂盒需掌握的知识点

发布时间2023-04-14        浏览次数：210

  操作elisa检测试剂盒需掌握的知识点

  elisa检测试剂盒的正确操作非常重要。以下是操作elisa检测试剂盒之前须掌握的一些要点，希望对于刚刚进入实验室的新手能够有所帮助。

  样本的准备：尽量使用新鲜样本，不使用有溶血，被细菌污染、标本保存时间过长和标本凝固不全的样本。ELISA检测宜采集新鲜标本，如不能立即测定，5天之内应4℃保存，对于1周后检测的样本应低温冻存;做好分装，长时间冻存的样本避免反复冻融。

  仔细阅读说明书，熟悉整个流程，推荐画出简要步骤图;提前准备试剂，比如常见20X洗涤液是浓缩液，需要用超纯水提前稀释准备好。一般的检测抗体和酶标二抗需要用对应的稀释液稀释至工作浓度。

  不同批次的试剂不要混用，检查各组分的有效期。

  预包被的酶标板条和各试剂组份需要室温平衡30 min以上，这样做的目的能使反应微孔内的温度较快地达到所需温度，预防后续实验中由于孵育温度或是时间不够充分，而将一些弱阳性样本不能检出。

  待测样本加样：待检样本过多时，建议分批操作;需要稀释的样本提前做好稀释，注意选对合适稀释液;控制好加样时间，避免加样费时过长造成误差;注意加样角度，垂直加入孔底，不要接触孔壁, 做到一份样本一个移液头，防止交叉污染。

  温育和洗板：温育时间和温度一般根据试剂盒的说明书进行选择。温育时可以采用水浴或者湿盒孵育,避免“边缘效应”。①手工洗板时，拍板时要垂直，避免交叉污染，用力不能过猛，防止抗原抗体复合物脱离;②洗板机洗板时应经常检查冲洗头是否通畅。

  显色：市售elisa检测试剂盒，一般是以四甲基联苯胺(TMB)为底物的显色液，反应条件为37℃或室温反应15～30 min。显色反应需要避光。

  读数和数据分析：终止后读取结果尽量在15min内完成，读取OD值时酶标仪需先预热15～30 min再进行。数据分析一般用四参数和直线拟合法，选择哪种拟合方式，可以依据标曲的相关系数(R2)来确定，R2一般需要大于0.99。

  ELISA试剂盒避免显色淡及灵敏度偏低的方法：

  A、尽量缩短运输时间，夏季应放冰块降温。

  B、试剂盒从2～8℃冰箱取出后打开盒盖，于室温平衡至少20分钟，确保所有试剂已平衡至室温。

  C、注意培养箱温度，放入反应板后尽量减少开启次数以免影响温度恒定，非隔水式培养箱尤其应注意。

  D、校正定时钟准确定时。

  E、按说明书要求保留洗涤时间，准确记住洗涤次数。

  F、校正移液器，吸嘴要配套，装吸嘴时要紧密，吸嘴内壁要清洁，一次性使用。

  G、使用新鲜合格的蒸馏水。

  elisa试剂盒上海古朵生物科技有限公司成立于上海浦东新区。是一家专门从事生物技术相关产品，励志研发和销售的综合性生物公司，产品远销多个国家和地区，我们将一如既往地秉承“一切为了满足客户的需求"的经营宗旨;牢固树立“以客户需求为准则、以市场需求为导向，不断开发高质量的新产品，提供客户满意的综合服务质量"的方针。