实验技巧：ELISA实验中缓冲溶液及试剂的配置要求

发布时间2023-07-19        浏览次数：140

  实验技巧：ELISA实验中缓冲溶液及试剂的配置要求

  elisa实验中是以抗原和抗体的免疫反应为基础，ELISA试剂以及各种溶液如何配置?zui近刚做了下ELISA实验，把各种ELISA配置方法汇总如下：(1) ELISA实验包被缓冲液(2) ELISA实验洗涤缓冲液(2) ELISA实验洗涤缓冲液(3) ELISA实验稀释液;(4)ELISA实验终止液(5)ELISA底物缓冲液(6)ELISA实验TMB(四甲基联苯胺)使用液(7) ELISA实验ABTS使用液(8)ELISC。古朵生物为您具体解析：

  试剂

  (1) ELISA实验包被缓冲液(PH9.6 0.05M碳酸盐缓冲液):

  NaHCO3 1.59克

  NaHCO3  2.93克

  加蒸馏水至1000ml

  (2) ELISA实验洗涤缓冲液(PH7.4 PBS)：0.15M

  KH2PO4     0.2克

  Na2HPO4·12H2O  2.9克

  NaCl      8.0克

  KCl     0.2克

  Tween-20 0.05%  0.5ml

  加蒸馏水至1000ml

  (3) ELISA实验稀释液：

  牛血清白蛋白(BSA) 0.1克

  加洗涤缓冲液至100ml

  或以羊血清、兔血清等血清与洗涤液配成5～10%使用。

  (4) ELISA实验终止液(2M H2SO4)：

  蒸馏水178.3ml，逐滴加入浓硫酸(98%)21.7ml。

  (5) ELISA底物缓冲液(PH5.0磷酸棗柠檬酸):

  0.2M Na2HPO4(28.4克/L) 25.7ml

  0.1M 柠檬酸(19.2克/L)   24.3ml

  加蒸馏水50ml。

  (6) ELISA实验TMB(四甲基联苯胺)使用液:

  TMB(10mg/5ml无水乙醇) 0.5ml

  底物缓冲液(PH5.5)   10ml

  0.75%H2O2 32μl

  (7) ELISA实验ABTS使用液:

  ABTS   0.5mg

  底物缓冲液(PH5.5)  1ml

  3%H2O2 2μl

  (8)ELISA实验封闭液：

  牛血清白蛋白(BSA) 5克

  加洗涤缓冲液至100ml。

  值得一提的是有的封闭液中含有脱脂奶粉，不适合长期保存。

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  为了保证ELISA实验的准确性，实验操作中加入的缓冲液和各组分一定要，将洗涤液加入酶标板中的时候防止加入的试剂混入另外一个酶标孔，严防交叉污染。

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