技术分享：ELISA试剂盒常见类型竞争法

  ELISA试剂盒常见类型竞争法

  竞争法ELISA试剂盒也称抑制或封闭法ELISA通过定量某种样品分析物对预计信号的干扰，来测定该分析物在样品中的含量，可通过以下方式进行：微孔板用一种分析物或一种对靶标分析物具有特异性的抗体包被(即直接法和间接法)，再添加一种有部分某种检测的靶标分析物，以竞争结合抗体上的位点。信号与分析物含量呈负相关，因此，如果靶标分析物的浓度较分析物高，靶标分析物竞争性结合有限量的标记抗体，参考信号将会较靶标分析物的浓度较低的情况增强。竞争法的理论基础是限量抗体，只有在限量抗体基础上，两种抗原才会形成竞争关系。该方法一般用来检测具有较少表位的小分子物质。

  实验概要

  以直接竞争法ELISA试剂盒为例，将特异性抗体吸附于固相载体，加入待测抗原(标准品或样本)和.生物素标记的检测抗原，二者竞争与固相抗体结合，然后加入辣根过氧化物酶标记的亲和素，经过温育和洗涤后加入显色底物。显色的深浅与样品中待测物质含量呈负相关。准备所有的试剂和梯度稀释的标准品。板条加入洗液静置浸泡30 秒。标准品孔加入2倍倍比稀释的标准品;非特异性结合(NSB)和大结合(B0)孔加入标准品稀释液或培养基。

  血清/血浆：

  样本孔加入样本;细胞培养上清：样本孔加入细胞培养上清。除了Blank和非特异性结合(TA)孔空白，NSB孔加入1×检测缓冲液，其余每孔加入稀释的偶联物。封膜，室温孵育1小时，洗涤6次。除了TA和Blank孔，其余每孔加入稀释的HRP标记的链霉亲和素。封膜，室温孵育30分钟，洗涤6次。TA孔加入稀释的HRP标记的链霉亲和素。每孔加入显色底物，避光，室温孵育5 - 30分钟。每孔加入终止液。30分钟内，在450nm波长检测OD值，参考波长570nm或630nm。

  注：以上步骤是以生物ELISA试剂盒为参考，不同厂家的ELISA试剂盒操作步骤可能不一样，开始实验前一定要仔细阅读产品说明书

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