技术分享：免疫荧光鉴定步骤

发布时间2023-11-06        浏览次数：72

  技术分享：免疫荧光鉴定步骤

  为了好的帮助客户提供真实的原代细胞，使用免疫荧光鉴定出提取的细胞类型，免疫荧光技术又称荧光抗体技术，是标记免疫技术中发展早的一种。它是在免疫学、生物化学和显微镜技术的基础上建立起来的一项技术。该技术的主要特点是：特异性强、敏感性高、速度快。 古朵生物技术人员提供的免疫荧光细胞鉴定的步骤，仅做参考：

  1.细胞爬片

  取4片玻璃片于24孔板中，每孔加入培养基1mL，加入细胞0.02million个/孔。置培养箱2h或过夜。

  2.固定

  细胞爬片后，吸出培养基，用PBS洗一遍，加入4% PFA于4℃固定30min。用PBS洗3×5min/次。也可后一次不吸出PBS，放4℃过夜。

  3.破膜封闭

  将玻片除去水分，置于培养皿支撑物上，

  玻璃片封闭液配置：0.5% Trition X-100与PBS 1:1混合，再加10% 血清，

  取50uL破膜封闭液滴于防水膜上，将玻片上有细胞的一面盖上2h。

  4.一抗孵育

  一抗配置：抗体与PBS 1:100(200)稀释

  破膜后，取50uL一抗于防水膜上(湿盒中)，将玻片有细胞的一面盖上置于4℃(多可放置一周)

  阴性对照组可用PBS代替一抗。

  5.二抗孵育

  PBS洗3×5min/次，

  二抗混合液配置：二抗：PBS=1:500

  DAPI:PBS=1:1000

  防水膜上滴50uL二抗混合液，盖上玻片，避光，室温放置2h。

  6.包埋

  PBS洗3×5min/次，玻片上各滴1滴Fluoromount-G，将有细胞的一面盖上。

  上海古朵生物科技有限公司成立于上海浦东新区。是一家专门从事生物技术相关产品，励志研发和销售的综合性生物公司，产品远销多个国家和地区，我们将一如既往地秉承“一切为了满足客户的需求"的经营宗旨;牢固树立“以客户需求为准则、以市场需求为导向，不断开发高质量的新产品，提供客户满意的综合服务质量"的方针。古朵试剂盒