ELISA测定试剂盒手工操作方法

发布时间2017-06-09        浏览次数：1064

导读：ELISA测定试剂盒是用于体外定性检测人血清或血浆中的抗人类戊型肝炎（HEV）病毒 IgM 抗体ELISA检测。ELISA试剂盒试验是一种敏感性高，特异性强，重复性好的实验诊断方法。由于其试剂稳定、易保存，操作简便，结果判断较客观等因素，已广泛应用在免疫学检验的各领域中。
ELISA测定试剂盒手工操作有浸泡式和流水冲刷式两种，浸泡式进程如下：
A、吸干或甩干孔内反应液；
B、用洗刷液过洗一遍（将洗刷液注满板孔后，即甩去）；
C、浸泡，即将洗刷液注满板孔，放置1-2分钟，间歇摇晃，浸泡时间不可随意缩短；
D、吸干孔内液体，吸干应彻底，可用水泵或真空泵抽吸，也可甩去液体后在清洗毛巾或吸水纸上拍干；
E、重复操作c和d，洗刷3-4次（或按说明规矩）。
ELISA测定试剂盒操作技术的影响：
1）应保证清洁，整个操作过程中保证酶标板不接触次氯酸，以上的措施可以使“花板”降至低限度，从而提高检测的特异性，并得到更准确。 
2）合理安排检测量，ELISA试剂盒以免反应板过多造成洗板等待时间长。
3）加酶试剂后用吸水纸在酶标板表面轻拭吸干。
4）用洗板机洗板时，保证洗液注满各孔，洗板针畅通，洗完板后在吸水纸（选择干净、无或少尘的吸水材料）上轻轻拍干，防止针口有纤维蛋白或异物，这些异物在洗板的过程中易产生拖带现象而导致“花板”的出现。
5）严重溶血：以HRP为标记的ELISA试剂盒测定中，残留在孔内的血红蛋白具有过氧化物酶样活性，催化底物显色造成假阳性。
减少ELISA测定试剂盒误差的方法
1.做实验时少说话，防止唾液掉进酶标条中。
2.加入一抗二抗需要放入37°。
3.如果同时做多个板子，多个板子别罗一起；尽量少用排枪。
4.加样时，由低浓度向高浓度加，这样减少跳孔的几率。
5.勤换枪头。
一、移液器的使用，加样（抗体）等需要准确定量的试剂时不使用排枪，经验证明排枪很不准确，易跳孔，不要图买低档的tips 因为ELISA不但会放大被检测的目的蛋白，也会放大非特异结合的杂质蛋白。
二、倍比稀释样品时，稀释倍数要小于10。
三、所有的装跟ELISA测定试剂盒相关试剂的容器，玻璃制品的要干烤过或者使用一次性的树脂容器。