公司新闻
公司新闻

悄悄告诉你:人γ干扰素elisa实验的过程

发布时间2019-11-04        浏览次数:94

      对于热爱化学实验的朋友们来说,这是非常有趣的一件事情。而每一个实验,不管它的方法与类型是什么样的,在实验之前,我们将它的试剂、实验器材等准备好。那么下一步,我们就要看它的操作步骤了,上海古朵悄悄告诉你:人γ干扰素elisa实验的过程。

    首先我们来看本次实验的标本要求,这里有两项,个就是在标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融。第二项要注意了,不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。

    了解了本次实验的标准要求之后,下面我再来看看上海古朵为您整理出的操作步骤:

1、标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
400 ng/L 5号标准品  150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液
200 ng/L 4号标准品  150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液
100 ng/L 3号标准品  150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液
50 ng/L 2号标准品  150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液
25 ng/L 1号标准品  150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液

2、加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl,待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品*终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
3、温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。  
4、配液:将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用
5、洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。
6、加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。
7、温育:操作同3。
8、洗涤:操作同5。
9、显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟.
10、终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
11、测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。

以上是实验的操作步骤,那计算方法是怎样的呢?

   我们以标准物的浓度为横坐标,OD值为纵坐标,在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式,将样品的OD值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。

上海古朵特别提醒您,操作人γ干扰素elisa实验中需要注意:
1、试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。
2、浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。
3、各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间控制在5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。
4、请每次测定的同时做标准曲线,做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本OD值大于标准品孔孔的OD值),请先用样品稀释液稀释一定倍数(n倍)后再测定,计算时请*后乘以总稀释倍数(×n×5)。
5、封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
6、底物请避光保存。
7、严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
8、所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
9、本试剂不同批号组分不得混用。
10、如与英文说明书有异,以英文说明书为准。

    实验完成之后要讲结果与心得记录下来哦!这里是上海古朵生物科技有限公司,我公司产品是含税含运费的,并且试剂盒提供免费代测及技术指导哦!