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怎么去除细胞上的支原体?

发布时间2020-09-16        浏览次数:19

细胞培养zui怕支原体污染,但有一些被污染的细胞不能被丢弃时该怎么办?今天小编把一个小绝招教给你,简单有效!

如何祛除细胞上的支原体污染?

据研究表明,约98%的支原体存在于细胞表面和细胞间隙。支原体直径约180~350nm,比细胞小很多,经低速离心与细胞分离。通过反复悬浮冲洗、离心,加上使用我们的Zell Shield?,即可在细胞培养四代以内有效地祛除支原体。

什么是Zell Shield??

Zell Shield?是一种链青霉素类复合抗生素,对细胞影响很小,可以有效抑制细胞培养中的支原体、细菌、霉菌、真菌等微生物增殖。普通的链霉素、青霉素对支原体没有效果。


具体是怎么操作呢?

1.首先把被支原体污染的细胞消化下来,放入离心管离心,弃上清。再加入干净的PBS悬浮冲洗细胞、低速离心(300~500r/min)、弃上清,反复三次。这样可祛除细胞表面60%~70%的支原体,支原体还剩约30%~40%.

2.细胞加入含1%Zell Shield?的新鲜培养基,传代培养。这时因培养基中Zell Shield?的抑制作用细胞培养过程中,虽然细胞增殖,但残留的支原体无法增殖。细胞需再次传代时,把第二代细胞消化下来,离心,弃上清。加入新鲜PBS悬浮冲洗、再离心、弃上清,反复三次,这时,细胞上残留的支原体大约已剩余为zui初污染量的10%左右。

3.细胞加入含1%Zell Shield?的新鲜培养基,传代培养。需再次传代时把第三代细胞消化下来,离心,弃上清。加入新鲜PBS悬浮冲洗、再离心、弃上清,反复三次,可再次祛除60%~70%的残余支原体,通过冲洗、抑制、换液等操作,细胞中支原体的残留污染量大约只剩3%左右。

4.细胞加入含1%Zell Shield?的新鲜培养基,

传代培养。

需再次传代时把第四代细胞消化下来,离心,弃上清。加入新鲜PBS悬浮冲洗、再离心、弃上清,反复三次,可再次祛除60%~70%的支原体,此时,支原体残留量大约已低于1%.支原体的增殖亦有密度要求,用Zell Shield?处理过四代的细胞,即便撤掉Zell Shield?,只要保证没有新的支原体人为再次带入,原有支原体也无法再增殖,随着传代,换液,支原体的老化、死亡,细胞中的支原体污染基本就彻底解决了。

敲黑板,划重点啦

1.每次传代时,重复三次对细胞悬浮冲洗步骤非常重要,操作要正确、规范,以达zui佳效果!

2.在培养基中加入1%Zell Shield?抑制支原体增殖!

3.使用安全的血清、培养基等试剂,不再有新的支原体加入!

做到以上三点即可确保祛除支原体污染。

Zell Shield?工作原理是什么?

支原体祛除剂Zell Shield?(培养基用)是一种即用型链青霉素类的复合抗生素,在培养基中1%的浓度通过阻止原核生物DNA及蛋白的合成,抑制细胞培养中遇到的细菌、真菌、霉菌增殖,geng可以有效、精-确地抑制支原体增殖,且对细胞基本安全。

品名:支原体祛除剂Zell Shield?(培养基用)

规格:50mL/瓶

储存温度:-18℃
使用注意事项:实验室初次使用,注意分装,分装后的小包装Zell Shield?仍-20℃避光冷冻保存,现配现用