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如何正确的融化血清!

发布时间2020-10-22        浏览次数:48

做细胞培养实验经常会对血清冻融,怎么才能有效正确的利用血清也有对应的方法,今天分析如何融化血清让实验geng好的完成。

与4℃过夜法相比,三步法为什么对血清geng好呢?重点有二!

其一:关系到沉淀出现的几率!

记得吗?血清在融化过程中,瓶子里冰块的底部你会看见亮亮的蛋白丝在下沉,如同蜂蜜溶于水时的亮线,这就是血清中大量的蛋白在快速融化,而水的熔点高于蛋白,融化的速度是比蛋白慢的。(回想一下高级冰淇淋和大棒冰的区别,你懂得!)试想,如果采用4℃过夜的方法,1瓶500毫升的血清融化好,大约需要10小时左右,蛋白先融化,沉降在瓶子的底部,水融化的速度比蛋白慢,于是造成大量蛋白溶于少量的水,此时就很容易有一些蛋白饱和析出,(大多是脂蛋白和纤连蛋白),这就是血清融化中产生沉淀的重要原因之一。

采用三步法,只要2.5个小时,温和有效地加快了水融化的速度,另一方面,融化过程中可以间断轻轻摇摆瓶子,让蛋白在瓶中混匀。此方法不但节约了时间,而且zui大限度减少了血清沉淀出现的几率。

血清融化过程中,蛋白质会比水先融化。冰块底部亮亮的细丝就是融化中的蛋白

其二:血清在培养细胞中,zui重要的是利用它的活性的因子,因此,融化过程中zui大限度地保留因子的活性,就变得非常重要。回忆一下,细胞复苏时,要保持细胞的活性,我们是要遵循“快融”原则还是“慢融”原则呢?快融!血清同样如此!三步法需要两个半小时,4℃过夜需要大约10个小时(冰箱一般设2-8℃,所以各实验室融化时间会稍有出入)。哪个速度对保留活性geng好?不言而喻