牛血清白蛋白的提取方法及用途

发布时间2021-03-04        浏览次数：575

CAS：9048-46-8，又称第五组分，牛血清白蛋白(BSA)，是一种常用的PCR扩增增强剂和稳定剂，能够起到稳定扩增酶、降低PCR抑制物的作用，常见于核酸检测试剂中，广泛应用于生物学诸多学科及医、药学各领域。

牛血清白蛋白(BSA)在动物细胞无血清培养中，起到生理和机械保护作用和载体作用。牛血清白蛋白（BSA）在生化实验中有广泛的应用，例如在western blot和制备ELISA板中的封闭试剂。牛血清白蛋白(BSA)在生化研究、遗传工程和医药研究，一般作为稳定剂被用于限制酶或者修饰酶的保存溶液和反应液中，也可用作医药保健食品、调味品。

牛血清中白蛋白（BSA）的制备方法很多，包括盐析法、有机溶剂沉淀法和热激法提取等，但目前的制备方法所得的牛血清白蛋白（BSA）收率或纯度都比较低，存在脂肪酸、蛋白酶、核酸酶以及内毒素等杂质，限制了牛血清白蛋白（BSA）的进一步应用，因此，一种高纯度从牛血清中分离白蛋白的方法十分关键。

专-利CN105017412B公开的制备牛血清白蛋白（BSA）的方法，克服了现有技术的不足，能够从牛血中提取出高纯度、高收率的牛血清白蛋白（BSA），且不含小分子物质以及只含较低浓度的内毒素。包括以下步骤：

首先向牛血清中加入生理盐水或PBS溶液将牛血清稀释；再向稀释后的牛血清中加入适量硫酸铵，2~8℃静置30min以上，离心收集上清液；

第二步，向上清液中加入2~3倍体积的PBS溶液，混匀后进行疏水层析，使用PBS溶液洗脱，收集洗脱液；

第三步，将洗脱液进行分子筛层析，收集不含盐和其它小分子的蛋白峰；所述层析填料为G10-G75葡聚糖；

第四步，使用阴离子交换层析进一步纯化牛血清白蛋白（BSA），通过0.1~1.5M浓度氯化钠进行梯度洗脱，收集精纯的牛血清白蛋白（BSA）；

zui后，经过对病原微生物进行灭活、分子筛层析、超滤浓缩、过滤除菌得到纯度高于99.5%的牛血清白蛋白（BSA）。

这种方法zui大程度地去除血浆中的杂质，有效提高了牛血清白蛋白（BSA）的纯度，对于其在生化研究、遗传工程和医药研究的应用具有重要价值。