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支原体污染的影响是什么?如何应对呢?

发布时间2021-05-06        浏览次数:363

细胞培养过程中,由于实验环境、操作者鼻腔口腔、实验器材等很多地方都有支原体的存在。因此,细胞发生支原体污染的频率很高。据美国数据统计,细胞发生支原体污染的几率在70%以上。

同时,由于支原体直径很小,仅在180nm~350nm之间,只有通过电镜才能看到。因此,支原体污染不易被实验者肉眼发觉。而支原体污染是个循序的过程,普通抗生素对其无效。因此,被支原体污染的细胞会持续受到影响,导致实验数据不准确。

支原体污染不仅是细胞培养中需要克服的现象,而且是制药、生物制品生产中需要加以避免的。支原体污染的影响是什么?

●抑制细胞增殖达50%

●影响免疫反应

●影响病毒增殖和感染率

●引起染色体畸变和易位

●干扰杂交瘤技术使被污染细胞在HAT培养基geng敏感

●在细胞壁上附着支原体会改变细胞壁完整性。

●降低电穿孔转染率达5%

总之,支原体污染影响细胞所有的代谢功能。

细胞被支原体污染,解决方案

方法一:确认细胞已被支原体污染,终止试验,丢弃所有被污染的细胞和耗材。

重新复苏细胞,注意选用未被污染的细胞株、血清和培养基,并规范操作。

方法二:对于珍贵的,样品不可再得的细胞,或价格昂贵的种子细胞,不但无法丢弃,而且作为种子细胞,还需要彻底根除支原体污染。

此时,需选用特异性的支原体杀除剂,清除污染,保护细胞。

方法三:对于已耗费很多时间,大量扩增起来的细胞,或经过基因转染、体外刺激等大量工作处理过的细胞,如果发现细胞被支原体污染了,怎么办?此时由于前期工作量巨大,使操作人员无法丢弃已有细胞。

但由于价格原因,又无法使用方法二提到的昂贵试剂杀除细胞上的支原体,

同时,实验人员还需要清除细胞上的支原体污染,让实验得以往下推进,以蕞终获得准确的实验数据。

此时,实验者可选用对支原体te效的抑制剂,通过对细胞的前期处理,中期加药,逐步通过4代左右的培养,得以将支原体污染彻底清除,确保试验顺利推进,结果准确。

工作环境中支原体污染,解决方案

如果实验室的细胞经常发生支原体污染,则需考虑的污染源可能来以下几个方面:

1、细胞种子被污染,解决方法参见以上“方法二”和“方法三”;

2、细胞培养中,使用未经严格过滤祛除支原体的牛血清。

某些血清生产厂,为低价占领市场同时还能获得充足利润,他们需要降低生产成本,所以会将生产中,成本蕞高的100nm过滤三次的步骤缩减,导致血清成为支原体的污染源。

(全球标准的血清生产规范为:粗血清需经七次过滤,蕞后三次为100nm加压过滤,可以清除支原体);

此情况需详细考察血清供货商的专业程度,通过索要《检测报告》等书面文件为血清获得geng多质量保证。同时,对专业水平不高的血清供货商,适当延长血清试用期。

3、洁净台、细胞培养箱内部、培养箱水槽、液氮罐,培养间内部的水浴锅等环境被支原体污染,可对工作区域进行消毒。

总之,细胞培养中,支原体污染发生频繁。有时带来的危害会造成实验的巨大损失。应经常检测和及时排除支原体污染,让细胞在健康安全的环境下生长,为获得准确的实验结果,打下良好的基础