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霉菌平板计数法的样品稀释流程

发布时间2021-07-16        浏览次数:83

霉菌平板计数法的样品稀释分为固体,半固体,液体样品三种状态,稀释流程如下:

1.固体和半固体样品:称取25g样品,加入225ml无菌稀释液(蒸馏水或生理盐水或磷酸盐缓冲液),充分振摇,或用拍击式均质器拍打1min~2min,制成1∶10的样品匀液。

2.液体样品:以无菌吸管吸取25mL样品至盛有225mL无菌稀释液(蒸馏水或生理盐水或磷酸盐缓冲液)的适宜容器内(可在瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠)或无菌均质袋中,充分振摇或用拍击式均质器拍打lmin~2min,制成1∶10的样品匀液。

3.取1mL,1∶10样品匀液注入含有9mL无菌稀释液的试管中,另换一支1mI无菌吸管反复吹吸,或在旋涡混合器上混匀,此液为1∶100的样品匀液。

4.按3操作,制备10倍递增系列稀释样品匀液。每递增稀释一次,换用1支lmL无菌吸管。

5.根据对样品污染状况的估计,选择2个~3个适宜稀释度的样品匀液(液体样品可包括原液),在进行10倍递增稀释的同时,每个稀释度分别吸取1mL样品匀液于2个无菌平皿内。同时分别取lmL无菌稀释液加入2个无菌平皿作空白对照。

6.及时将20mL~25mL冷却至46℃的马铃薯葡萄糖琼脂或孟加拉红琼脂(可放置于46℃±1℃恒温水浴箱中保温)倾注平皿,并转动平皿使其混合均匀。置水平台面待培养基完全凝固。

稀释以后,开始培养琼脂凝固后,正置平板,置28℃±1℃培养箱中培养,观察并记录培养至第5d的结果