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多肽合成的建立，了解一下！
发布时间2021-11-23 浏览次数：322
根据Fmoc化学合成，先将所需合成的目标多肽的C-端氨基酸的羧基以共价键形式与一个不可溶的高分子树脂相接，然后以这一氨基酸的氨基做为多肽合成的起始点，同其他的氨基酸早已活化的羧基功效产生肽键，持续重复这一过程，就可以获得多肽。依据多肽的氨基酸构成不一样，多肽后处理方法不一样，纯化方法也是有差别。
1.做免疫用的多肽多长为合适?
一般约10-15个氨基酸，自然长一些免疫效果非常的好一些，但是合成费用也会提升。MAP多肽则期待长短在15aa之上，实际效果不错。此外，10aa下列的多肽免疫实际效果非常差。
2.免疫用多肽的纯度必须很高吗?
一般而言，免疫用Peptide，70-85%就可以。
3.大家合成的多肽溶解性不太好，多肽就有问题对不对?
难以准确预测一个多肽的溶解性及合适的溶剂是什么。假如多肽无法溶解就觉得多肽合成有问题这一观念并有误。
4.多肽情况是怎样?如何保存存储?
大家带来的多肽是粉状，一般为灰白，构成不一样，多肽粉末状的色调有差别，多肽一般长期性储存必须遮光储存，并应储存在-20度，短期内能够储存在4度。能够短期内得话是以室内温度运送。
5.怎样溶解多肽
溶解多肽是比较复杂的事儿，一般难以一下子明确合适的有机溶剂。一般是先取一点实验，在都没有明确合适的有机溶剂前千万别合部溶解。以下方式有利于您挑选合适的有机溶剂：
(1)判断多肽的正电荷特殊，设置酸性氨基酸Asp(D),Glu(E)和C端COOH为-1；碱性氨基酸Lys(K),Arg(R),His(H)及N端NH2为+1,其他氨基酸的正电荷为0。测算出将电荷数。
(2)假如净电荷数>0，多肽为碱性，自来水溶解：如果不溶解或溶解性并不大，加入醋酸(10%之上)；假如多肽还不能溶解，加入少量TFA(25ul)溶解，然后加入500ul水稀释。
(3)假如净电荷数<0，多肽为酸性，自来水溶解；如果不溶解或溶解性并不大，加入氨水(25ul)溶解，然后加入500ul水稀释。
(4)假如净电荷数=0，多肽为中性，一般必须用有机溶剂如乙腈，甲醇或异丙醇，DMSO等溶解。也有人建议必须尿素来溶解疏水性非常大的多肽。
6.非HPLC纯化的多肽中有什么杂质?
粗品和除盐等级的多肽中多肽和非多肽类杂质：如非总长多肽和多肽后处理的一些原材料如DTT、TFA等。
7.HPLC纯化的多肽有什么杂质?
历经HPLC纯化的多肽，仍会出现一些一些杂质存有，在其中的杂质主要是短肽和少量TFA。
8.多长的多肽为合适?
多肽合成必须考虑到多肽的长短，正电荷，亲疏有别水溶性等要素。长短越长，合成粗品的纯度和产出率都随之减少，纯化的困难和没法合成的概率便会大些。自然多肽功能分区的编码序列是难以改的，可是为了好地多肽的顺利合成，有时候必须在作用取的上中下游提升一些辅助氨基酸，以改进多肽的溶解性和亲疏有别水溶性。假如多肽过短，合成也很有可能有问题，关键情况是合成的多肽后面处理方式中有一定的难度系数，5肽下列的多肽，一般要有亲水性的氨基酸，不然后处理难度系数增加。15个氨基酸残基下列的多肽一般都能够取得认可的产出率和得率。
9.怎样从多肽编码序列中判断多肽的溶解性?
(1)多肽中假如带有高比率的疏水性较强的氨基酸如和Leu,Val,IIe,Met,Phe和Trp，多肽难以溶解与水溶性水溶液中或压根不太可能溶解。这种氨基酸不论是纯化或合成，都是有很有可能有问题。
(2)一般状况下疏水性氨基酸的占比<50%，不可以连续5个连续aa为疏水性，带正电荷的氨基酸的(正电K,R,H,N-terminus,负电D,E,C-terminus)的占比做到20%，在多肽的N或C短假如能提升旋光性氨基酸，还可以改进溶解性。
10.为何带有Cys,Met,或Trp的多肽难合成?
带有Cys,Met，或Trp的多肽无法合成，与此同时难以获得高纯的商品。关键是因为这种官能团不稳定，易空气氧化。这种多肽的应用和存储都必须需注意，防止不断打开外盖。
11.为何有一些多肽的合成产出率或纯度会非常低?
多肽合成与引子合成有非常大的差别，不可以合成的引子非常少，可是不可以合成的多肽经常有。如Val,Ile,Tyr,Phe,Trp,Leu,Gln,和Thr这种氨基酸邻或重复时，多肽链在合成过程中无法完全舒展溶解，合成效率降低。下列多种情况，合成效率和物质的纯度都非常低，如：重复Pro,Ser-Ser，重复Asp，4个连续Gly等。
12.多肽是怎样纯化的?
多肽纯化一般应用正相反柱(如C8，C18等)，214nm。缓存管理体系一般为含TFA的有机溶剂，pH2.0。BufferA为含0.1%TFAinddH2O，BufferB为1%TFA/ACN/pH2.0。纯化前用BufferA溶解；假如溶解不太好，用BufferB溶解后，然后用BufferA稀释；对疏水性强的多肽，有时候还必须加入少量的FormicAcid或醋酸。HPLC剖析多肽粗物质，假如多肽不长(15aa下列)，一般会出现主峰，主峰一般为总长物质；针对20aa之上的长肽，要是没有主峰，HPLC需配搭Mass来判断相对分子质量，从而明确哪个峰是所需合成的多肽