操作说明：基因组DNA污染清除试剂

发布时间2023-05-15        浏览次数：132

  操作说明：基因组DNA污染清除试剂

  描述：

  制备RNA 时基因组DNA 污染将会干扰下游PCR 或Northern Blot 实验。用RNase-free 的DNase 消化DNA 也会导致RNA 降解。基因组DNA 污染清除试剂不含DNA 酶，在强烈抑制RNA 酶的同时彻底清除RNA 样品中的DNA 和蛋白质污染，进一步纯化RNA。后通过乙醇沉淀回收得到的RNA 纯度极高，完全不影响原有RNA 质量和下游应用。

  用途：非酶法清除RNA 样品中的基因组DNA 污染。每ml 试剂处理～100 μg RNA 样品。

  组成：50 ml 基因组DNA 污染清除剂，100 次。

  储存：4℃避光储存。

  使用方法：

  根据起始RNA 溶液的体积，按比例加入所需试剂。以下操作以100 μl RNA 溶液为例。除非RNA 溶液中RNA 浓度很低，为方便操作可用高压灭菌过的蒸馏水将不足100 μl 的RNA样品的体积补充到100 μl。

  1. 每100 μl RNA 溶液加入500 μl 基因组DNA 污染清除试剂。充分混匀，冰育1 分钟。

  2. 加入自备的lv仿100 μl。充分混匀，冰上孵育1 分钟。

  3. 12000 rpm 低温离心10 分钟。

  4. 取上清约300 μl 转移到新管。应留下少量上清勿触动含DNA 的中间相，否则重新离心。

  5. 加2-2.5 倍上清体积的无水乙醇，充分混匀，冰上或-20C 孵育20 分钟。如果取出的上清液量较多，此步骤可加入0.6-1 倍上清液体积的异bing醇沉淀。

  6. 12000 rpm 低温离心10 分钟。弃上清。

  7. 加500 μl 70%乙醇，振荡洗涤沉淀。12000 rpm 低温离心10 分钟。弃尽上清。

  8. 敞开管口，空气干燥RNA 沉淀。

  9. 加入适量自备的蒸馏水或缓冲液溶解RNA 沉淀。1% 普通琼脂糖凝胶电泳检查RNA。

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