饥饿激素(GHRL)ELISA试剂盒说明:
1.试剂盒保存:-20℃(较长时间不用时);2-8℃(频繁使用时)。
2.浓洗涤液低温保存会有盐析出,稀释时可在水浴中加温助溶。
3.中、英文说明书可能会有不一致之处,请以英文说明书为准。
4.刚开启的酶联板孔中可能会含有少许水样物质,此为正常现象,不会对实验结果造成任何影响。
大鼠饥饿激素(GHRL)
ELISA试剂盒技术原理:
(1). 抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。
(2). 结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性。
(3). 酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性,又保留酶的活性。
(4). 受检标本与固相载体表面的抗原或抗体起反应。再加入酶标记的抗原或抗体,也通过反应而结合在固相载体上。
(5). 此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一定的比例。
(6). 加入酶反应的底物后,底物被酶催化成为有色产物,产物的量与标本中受检物质的量直接相关,故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。测定方法具有很高的敏感度(pg-ng/ml水平),并且重复性好。以免疫学反应为基础,将抗原、抗体的特异性反应与酶对底物的催化作用相结合起来的一种敏感性很高的试验技术。
大鼠饥饿激素(GHRL)ELISA试剂盒(小鼠,人)样本处理方式:
1、胃液、唾液、尿液的采集方式一般现采现用,胃液、唾液的采集时间是空腹采集,一般隔夜尿不采集;
2、采集血清时,一般要加入总体积1%的抗凝剂,采集后先室温或4℃静置半小时后,800-1000rmpx5min分离,取上清,-20℃或4℃保存备用;
3、组织提取液、肺泡灌洗液等,采集后离心分离,800-1000rmpx5min,取上清,-20℃或4℃保存备用;
4、采集血浆时一般不加抗凝剂,采集后立即离心800-1000rmpx5min分离,取上清,-20℃或4℃保存备用;
5、不贴壁细胞(分泌性蛋白),将培养基和细胞转移至10ml离心管,500-800rmpx10min,吸取上清至另一10ml离心管中,10000rmpx10min,-20℃或4℃保存,作为标本进行检测,如有需要可进行透析或纯化处理。
大鼠饥饿激素(GHRL)ELISA试剂盒优点:
1、原装进口抗体——、灵敏、特异
2、规范包被操作——吸附均匀,吸附性好,空白值低,孔底透明度高
3、的优化方案——重复性高,可靠性强
4、技术服务要求:专业,规范,
5、适用于体液、组织匀浆液、细胞培养上清液、尿液等多种类型的样本
大鼠饥饿激素(GHRL)ELISA试剂盒(小鼠,人)操作流程:
(1)待测样品孔中每孔加入待测样品100μl,每种样品设3个平行孔;设两个阴性对照孔,每孔加未处理组的细胞裂解液100μl;另设一个空白对照孔,加入纯细胞裂解液100μl。 (2)酶标板置4℃,包被过夜。
(3)洗板:吸干孔内反应液,用洗涤液过洗一遍(将洗涤液注满板孔后,即甩去),之后将洗涤液注满板孔,浸泡1-2分钟,间歇摇动。甩去孔内液体后在吸水纸上拍干。重复洗涤3-4次。
(4)阴性对照孔每孔加入PBS 50μl,样品孔及空白孔每孔加入1:500稀释的兔抗人AIF抗体工作液50μl
(5)酶标板置37℃培养箱的湿盒内,孵育60min。
(6)洗板,同(4)。
(7)每孔加1:5000稀释的HRP-标记的山羊抗兔抗体工作液 100μl。
(8)酶标板置37℃培养箱的湿盒内,孵育60min。
(9)洗板,同(4)。
(10)每孔加TMB显色液 100μl,轻轻混匀10s,置37℃暗处反应15-20min。
(11)每孔加100μl 2mol/L H2SO4终止反应。
(12)分别测450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2,终测得的OD值为两者之差(W1-W2),以减少由容器上的划痕或指印等造成的光干扰。
(13)数据处理:在得出标本(S)和阴性对照(N)的 OD值后,计算S/N值。S/N≥2.1为阳性判定标准。
大鼠饥饿激素(GHRL)ELISA试剂盒(小鼠,人)注意事项:
1)试剂应按标签说明书储存,使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃,不可保存。
2)实验中不用的板条应立即放回包装袋中,密封保存,以免变质。
3)不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。
4)使用一次性的吸头以免交叉污染,吸取终止液和底物A、B液时,避免使用带金属部分的加样器。
5)使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。
6)洗涤酶标板时应充分拍干,不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。
7)底物A应挥发,避免长时间打开盖子。底物B对光敏感,避免长时间暴露于光下。避免用手接触,有毒。实验完成后应立即读取OD值。
8)加入试剂的顺序应一致,以保证所有反应板孔温育的时间一样。
9)按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。
饥饿激素(GHRL)ELISA试剂盒原理:采用双抗体夹心ABC-ELISA法。
标本的处理:
(1)细胞培养上清液
根据需要用试剂盒中的标准稀释液稀释样品,然后按照说明书所述方法检测。推荐稀释浓度是稀释5倍。
(2)脑脊液
根据需要用试剂盒中的标准稀释液稀释样品,然后按照说明书所述方法检测。推荐稀释浓度是5倍。
(3)血浆
①用EDTA2K离心收集在真空血液收集管中的血液,5,000×g,15分钟,4℃,分离血浆样品,然后储存在零下80℃直到使用。
②用试剂盒中的标准稀释液90倍稀释血浆以避免血浆中的干扰物质影响检测,按照说明书操作。
大鼠饥饿激素(GHRL)ELISA试剂盒概括为四个方面 :
1、免疫酶染色各种细胞内成份的定位。
2、研究抗酶抗体的合成。
3、显现微量的免疫沉淀反应。
4、定量检测体液中抗原或抗体成份
饥饿激素(GHRL)ELISA试剂盒部分相关产品如下:
大鼠可溶性白细胞分化抗原30配体(sCD30L)ELISA试剂盒
兔信号传导子及转录激活子2,113kDa(STAT2)ELISA试剂盒
鸡ATP结合盒转运体G2(ABCG2)ELISA试剂盒
兔EB病毒BZLF1斑马基因(BZLF1/EBV)ELISA试剂盒
兔破骨细胞刺激因子1(OSTF1)ELISA试剂盒
土壤多酚氧化酶ELISA试剂盒
人内皮抑素(ES)ELISA试剂盒
大鼠基质金属蛋白酶26(MMP-26)ELISA试剂盒
牛细胞角蛋白18-M30(CK18-M30)ELISA试剂盒
大鼠鸟苷酸结合蛋白4(GBP4)ELISA试剂盒
猪脂蛋白脂酶(LPL)ELISA试剂盒
大鼠基质金属蛋白酶抑制因子4(TIMP-4)ELISA试剂盒
牛颗粒酶M(GZMM)ELISA试剂盒
鱼肿瘤坏死因子(配体)超家族,成员12(TNFSF12)ELISA试剂盒
猴信号传导与转录激活子(STAT)ELISA试剂盒
大鼠血清总补体(CH50)ELISA试剂盒
猴多聚ADP核糖聚合酶(PARP)ELISA试剂盒
人可溶性瘦素受体(sLR)ELISA试剂盒
犬多巴胺脱羧酶(DDC)ELISA试剂盒