皮质醇(COR)ELISA试剂盒(猴,牛,鸡)标本要求:
1.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融。
2.不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
操作步骤
3.标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可向客服索取说明书
4.加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl,待测样品孔中 先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
5.温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
6.配液:将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用。
7.洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。
8.加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。
9.温育:操作同3。
10.洗涤:操作同5。
11.显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟。
12. 终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
13. 测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。
皮质醇(COR)ELISA试剂盒(猴,牛,鸡)注意事项:
1.实验严格按照说明书的操作进行,实牛胰岛素受体底物2(IRS-2)ELISA检测试剂盒验结果判定必须以酶标仪读数为准。
2.酶标包被板开封后如未用完,应立即装入密封袋中加干燥剂保存。
3.建议所有的标准品、样本和空白对照都做双份检测,取平均值,以减小实验误差。
4.若显色过浅,可适当延长底物温育时。
5.标本宜在新鲜时检测。如有细菌污染,菌体中可能含有内源性HRP,也会产生假阳性反应。保存过久可发生聚合在ELISA中可使本底加深。
6.冻结标本溶解后,蛋白质局部浓缩,分布不均,应充分混匀宜轻缓,避免气泡,可上下颠混合,不要在混匀器上强烈震荡。
7.浑浊或有沉淀的标本应先离心或过滤,澄清后再检测。
8.反复冻融会使蛋白效价降低,所以代测样本如需保存作多次检测,宜少量分装冰存。
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