小鼠胱天蛋白酶3(CASP3)ELISA检测试剂盒适用领域:
1.免疫酶染色各种细胞内成份的定位
2.研究抗酶抗体的合成
3.显现微量的免疫沉淀反应
4.定量检测体液中抗原或抗体成份
小鼠胱天蛋白酶3(CASP3)ELISA 试剂盒原理:采用双抗体夹心ABC-ELISA法。
标本的处理:
(1)细胞培养上清液
根据需要用试剂盒中的标准稀释液稀释样品,然后按照说明书所述方法检测。推荐稀释浓度是稀释5倍。
(2)脑脊液
根据需要用试剂盒中的标准稀释液稀释样品,然后按照说明书所述方法检测。推荐稀释浓度是5倍。
(3)血浆
①用EDTA2K离心收集在真空血液收集管中的血液,5,000×g,15分钟,4℃,分离血浆样品,然后储存在零下80℃直到使用。
②用试剂盒中的标准稀释液118倍稀释血浆以避免血浆中的干扰物质影响检测,按照说明书方法检测。
小鼠胱天蛋白酶3(CASP3)ELISA试剂盒代测双抗体夹心法(检测未知抗原):
1、用缓冲液将抗体稀释至1-10ug/ml。在反应孔中加0.1ml,4℃ 过夜。次日,弃去孔内溶液,用洗涤缓冲液洗3次。
2、加样:加一定稀释的待检样品0.05ml于上述已包被之反应孔中,置37℃ 孵育1小时。然后洗涤(同时做空白孔,阴性对照孔及阳性对照孔)。
3、加酶标抗体:于各反应孔中,加入新鲜稀释的酶标抗体(经滴定后的稀释度)0.05ml。37℃ 孵育0.5~1小时,洗涤。
4、加底物液显色:于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃ 10~30分钟。
5、终止反应:于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml
6、结果判定:可于白色背景上,直接用肉眼观察结果:反应孔内颜色越深,阳性程度越强,阴性反应为无色或浅,依据所呈颜色的深浅,以“+”、“-”号表示。也可测OD值:在ELISA检测仪上,于450nm(若以ABTS显色,则410nm)处,以空白对照孔调零后测各孔OD值,若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍,即为阳性。
间接法(检测未知抗体):
1、用包被缓冲液将已知抗原稀释至1-10ug/ml, 每孔加0.1ml,4℃过夜。次日洗涤3次。
2、加样:加一定稀释的待检样品(未知抗体)0.05ml于上述已包被之反应孔中,置37℃孵育1小时,洗涤。(同时做空白、阴性及阳性孔对照)
3、加酶标抗体:于反应孔中,加入新鲜稀释的酶标第二抗体(抗抗体)0.05ml,37℃孵育30-60分钟,洗涤,后一遍用DDW洗涤。
4、加底物液显色:于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃ 10~30分钟。
5、终止反应:于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml
6、结果判定:可于白色背景上,直接用肉眼观察结果:反应孔内颜色越深,阳性程度越强,阴性反应为无色或浅,依据所呈颜色的深浅,以“+”、“-”号表示。也可测OD值:在ELISA检测仪上,于450nm(若以ABTS显色,则410nm)处,以空白对照孔调零后测各孔OD值,若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍,即为阳性。
小鼠胱天蛋白酶3(CASP3)ELISA试剂盒代测注意事项:
1)试剂应按标签说明书储存,使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃,不可保存。
2)实验中不用的试剂应按标签说明书储存,使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃,不可保存。
3)实验中不用的板条应立即放回包装袋中,密封保存,以免变质。
4)不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。
5)使用一次性的吸头以免交叉污染,吸取终止液和底物A、B液时,避免使用带金属部分的加样器。
6)使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。
7)洗涤酶标板时应充分拍干,不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。
8)底物A应挥发,避免长时间打开盖子。底物B对光敏感,避免长时间暴露于光下。避免用手接触,有毒。实验完成后应立即读取OD值。
9)加入试剂的顺序应一致,以保证所有反应板孔温育的时间一样。
10)按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。
小鼠胱天蛋白酶3(CASP3)ELISA试剂盒性能特点:
1. 准确性:标准品线性回归与预期浓度相关系数R值,大于等于0.9900。
2. 灵敏度:zui低检测浓度小于(参考说明书)
3. 特异性:不与其它可溶性结构类似物交叉反应。
4. 重复性:板内、板间变异系数均小于15%。
5. 贮藏:2-8℃,避光防潮保存。
6. 有效期:6个月
小鼠胱天蛋白酶3(CASP3)ELISA检测试剂盒部分相关产品如下:
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