牛血小板活化因子(PAF)ELISA试剂盒使用说明书注意事项:
(1).实验中不用的板条应立即放回包装袋中,密封保存,以免变质。
(2).试剂应按标签说明书储存,使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃,不可保存。
(3).使用一次性的吸头以免交叉污染,吸取终止液和底物A、B液时,避免使用带金属部分的加样器 。 (4).不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。
(5).洗涤酶标板时应充分拍干,不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。
(6).使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。
(7).加入试剂的顺序应一致,以保证所有反应板孔温育的时间一样。
(8).按照鸡血红蛋白(HB)ELISA检测试剂盒说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。
(9).底物A应挥发,避免长时间打开盖子。底物B对光敏感,避免长时间暴露于光下。避免用手接触,有毒。实验完成后应立即读取OD值。
牛血小板活化因子(PAF)ELISA试剂盒使用说明书操作步骤:
1、加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl,待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
2、温育:用封板膜封板后置 37℃温育30分钟。
3、配液:将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用
4、洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此
重复5次,拍干。
5、加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。
6、显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色
10 分钟.
7、终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
8、测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。测定应在加终止液后15分钟以内进行。
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